金天格膠囊對骨質疏松癥的臨床研究

    骨質疏松癥是一種以骨強度受損為特征的骨骼疾病。其病因很多，最終結果為成骨過程低于破骨過程，骨量和骨質量下降。成骨細胞是骨質生發、形成的物質基礎，只有其不斷的分裂增殖才可以產生豐富的膠原基質，通過礦化作用形成更多骨質。通過刺激成骨細胞增殖、促進骨組織形成是治療骨質疏松的主要方法之一。有研究認為虎骨能增加骨質疏松大鼠的血鈣水平、提高骨密度、增加骨強度及韌性，同時減少骨吸收，這些作用與天然虎骨一致。但人工虎骨促進成骨作用的細胞機制尚未明確。金天格膠囊的主要成份為人工虎骨粉。本研究觀察金天格膠囊對成骨細胞的影響，探討其對成骨細胞作用的機理。 

    細胞培養：采用改良的胰酶．膠原酶序貫消化法培養人成骨樣細胞。骨科手術取成人(30～50歲無骨代謝疾病的骨折患者)的松質骨l一2 g，去除外膜結締組織，剪成2mm 大小碎粒，用胎牛血清(PBS)沖洗3次，用0，25％胰酶．ED—TA 37℃消化兩次，每次20min，棄去消化液，繼用l mg／ml IV型膠原酶于37~C消化5次，反復振搖，每次20min，棄除前兩次消化上清液，取最后3次消化液，離心(1200fmin)10min，棄上清液后用含l5％PBS的MEM 培養液重懸細胞，接種于75cm~75cm培養瓶，于37℃，25％CO 條件下培養，次日換液棄去懸浮細胞，每隔兩日換液1次；消化后的骨碎片可貼于25cm~25cm培養瓶壁(25—40個碎骨粒／瓶)，加入含15％ PBS的MEM 培養液，37~C，25％CO 條件下培養，l周后換液，以后隔兩日換液1次，即得到酶消化法及骨片貼附法所獲得的人成骨樣細胞(HOB)。 

    細胞鑒定：采用倒置顯微鏡和電鏡進行形態學觀察，采用改良Gomon鈣一鈷法做堿性磷酸酶染色。 

    藥液配制：應用金天格膠囊(金花企業股份有限公司高新制藥廠生產)lg，加入含l5％PBS的MEM培養液(pH值為7．3．7．4，過濾除菌)lOml中，用0．451~m濾器除菌，配成濃度為0．1g／ml的溶液。依上法可配制成濃度為5p~g／ml、10l~g／ml、20~g／ml的金天格膠囊藥液。 

    統計方法：定量指標用均數±標準差表示。采用x 檢驗或t檢驗，P<0．05為有統計學意義。 

    結果：細胞形態觀察用酶消化法獲得的HOB，倒置顯微鏡下觀察，呈紡錘形、多邊形及梭形，呈”鋪路石ll{羊排列，局部有密集的細胞團。電鏡下觀察，呈類圓形，表面有微絨毛突起，細胞中富含較多線粒體、擴張的粗面內質網及大量的分泌空泡，細胞膜下可見豐富的顆粒狀電子致密物，細胞核較大，可見核膜內陷及大的核仁。符合成骨細胞特點。 

    細胞染色：堿性磷酸酶染色細胞胞漿內有棕黑色沉淀并掩蓋細胞核上，染色呈強陽性，符合成骨細胞特點。 

    藥物作用效果：在不同藥物濃度下觀察各指標結果上表顯示金天格膠囊藥液可以明顯刺激成骨細胞的增殖，與不用藥組對比有顯著差異，并隨藥物濃度的增加，成骨細胞數明顯增多(P<0．05)；反映成骨細胞活性的AKP、BGP隨藥物濃度的增加也相應升高，與不用藥組對比有顯著差異(P<0．05)；反映破骨細胞活性的PYD則隨藥物濃度的增加而相應下降，與不用藥組對比有顯著差異。 

    本研究聯合檢測金天格膠囊藥液干預試驗后的AKP、BGP、PYD的含量并進行細胞計數，結果表明加藥后細胞數隨藥物濃度增加而增加，AKP、BGP水平也相應提高，Ⅲ組的AKP、BGP水平較I組和II組增加明顯，與不用藥組對比存在統計學差異(P<0．05)，說明金天格膠囊有直接刺激成骨細胞增殖及加強其活性的作用，并且提高金天格膠囊的濃度(用量)有利于藥效的發揮。再者，標本檢測中發現的PYD，可能是成骨細胞傳代過程中部分細胞破壞，釋放某種物質降解膠原產生的，本研究顯示加大金天格膠囊藥液的濃度可使培養液中PYD的濃度下降(P<0．05)，這說明金天格膠囊也有抑制破骨的作用。金天格膠囊的原料藥來自動物骨骼，含豐富的骨膠原蛋白，是參與骨形成的重要有機基質翻，同時還含有參與骨形成的重要無機基質。本研究顯示金天格膠囊直接刺激成骨細胞增殖及加強其活性的作用可能是所含的骨膠原蛋白、鈣、磷及微量元素等共同作用的結果。 

    (本文節選自《金天格膠囊對成骨細胞作用的研究》)

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